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(蠕动泵 bt100-2j)层析柱的一些总结介绍

时间:2021-06-02 17:57 点击:
多数微生物碱性蛋白酶不耐热,碱土金属,特别是钙对碱性蛋白酶有明显的热稳定作用 碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂之一,在丝绸、制革工业中也有广泛用途   
热稳定性 将酶液分别置于不同的温度条件下(30℃,40℃,50℃,60℃,70℃)保温 10min 后,立即在 0℃冰浴中冷却,然后在 40℃下测碱性蛋白酶活力,以剩余的酶活性作为评价酶的热稳定性的指标。测量三个重复求平均值,将**高的酶活力定义为 100%,分别计算不同温度条件下蛋白酶的剩余酶活性与**高酶活性的比值。  
以ph7的缓冲液为例,如果你的目标蛋白等电点小于7,呢就带负电荷,用阴离子交换的柱子,如果是大于7,那选择阳离子交换的柱子,如果等电点是7,那上样的缓冲液ph大于它的等电点用阴离子,小于7的用阳离子,如此类推就可以 
缓冲液的ph=pi值+1,上阴离子柱,=pi值-1,上阳离子柱,一般缓冲液ph范围在6.5~8.5之间,与pi值相差1个ph是比较理想的。 
如果不清楚pi值,可以将蛋白溶到ph梯度的缓冲液里,然后分别试阳离子和阴离子填料(50ul左右得体积就够了),看那个ph下挂得好。 
强离子交换剂: 在宽ph范围内载量稳定,所以他的优点是不同ph下载量恒定,可控性好,平衡过程快速、简单。 
弱离子交换介质的缺点:适用的ph范围比较小,随着ph不同载量发生变化。但是大部分蛋白等电点在5.5 ~ 7.5 。因此强/弱离子交换介质都可以使用 
弱离子交换介质(deae、anx、cm)优点在于:和强离子交换介质的选择性不同,因此我们一般先使用强离子交换,如果优化条件还是达不到理想的分离效果,可以尝试弱离子交换,用选择性不同的介质尝试一下。 
因此弱离子交换与强离子交换由于选择性不同,可以说是对不同蛋白的结合力有差异。s  
技术规格 离子交换剂类型 
q sepharose ff                    季氨基,强阴离子 deae sepharose ff              二乙基氨基乙基,弱阴离子 anx sepharose 4ff              二乙基氨基丙基,弱阴离子 sp sepharose ff                    磺丙基,强阳离子 cm sepharose ff                    羟甲基,弱阳离子 离子容量 
q sepharose ff                0.18-0.25mmol(cl-)/ml deae sepharose ff               0.11-0.16mmol(cl-)/ml anx sepharose 4 ff               0.13-0.18mmol(cl-)/ml sp sepharose ff                0.18-0.25mmol(h )/ml cm sepharose ff                 0.09-0.13mmol(h )/ml 动态载量 
q sepharose ff                    120mg hsa/ml 填料 deae sepharose ff                 110mg hsa/ml 填料 anx sepharose 4 ff              5mg 甲状腺球蛋白/ml 填料 sp sepharose ff                  70mg rnaase/ml 填料 cm sepharose ff                  50mg rnaase/ml 填料 
压力/流速 
q sepharose ff     400-700cm/h,100kpa,xk50/30层析柱,柱床高15cm deae sepharose ff    300-600cm/h,100kpa,xk50/30层析柱,柱床高15cm anx sepharose 4 ff   **少200cm/h,100kpa,xk50/60层析柱,柱床高25cm  sp sepharose ff     400-700cm/h,100kpa,xk50/30层析柱,柱床高15cm cm sepharose ff     300-600cm/h,100kpa,xk50/30层析柱,柱床高15cm  
平均颗粒大小                     90um(45-165um)   基质 
sepharose ff                    高度交联琼脂糖,6% sepharose 4 ff                  高度交联琼脂糖,4%   
ph稳定性 
q sepharose ff                1-14(短期),2-12(长期) deae sepharose ff              1-14(短期),2-13(长期) anx sepharose 4 ff              2-14(短期),3-13(长期) sp sepharose ff               3-14(短期),4-13(长期) cm sepharose ff                2-14(短期),4-13(长期)   
化学稳定性                        
在所有常用的水溶液缓冲液中稳定:8m尿素、6m盐酸胍、70%乙醇、1m naoh和1m醋酸 20%乙醇(q , deae,anx,cm ),含0.2m醋酸钠的20%乙醇(sp)  
保存                  
保存温度                        4℃-30℃ l 1m naoh和醋酸仅在清洗时使用 
  
phenyl-sepharose hp 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 6ff 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析介质 粒    径: 45-165µm 工作ph值:3-13 
应    用:疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等 产品名称:苯基-琼脂糖凝胶 h.p. 性    状:白色微球 凝胶类型:疏水层析填料 粒    径: 24-44µm 工作ph值:3-13 

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